Symmetry C18色谱柱技术解析
一、基础特性
Symmetry C18色谱柱采用C18键合硅胶作为固定相,其表面键合着18碳烷基链的硅胶颗粒(粒径5μm)。该色谱柱具有以下核心特性:
- 分离效率高:理论塔板数可达12000-15000
- 化学稳定性强:耐受pH 2-8流动相环境
- 流速适应性广:推荐流速1-5mL/min
二、典型应用
应用领域 | 适用物质类型 | 优化建议 |
药物分析 | 小分子药物、代谢产物 | 流动相比例60:40(水:甲醇) |
生物大分子分析 | 多肽、蛋白质 | 采用梯度洗脱程序 |
环境检测 | 农药残留、塑化剂 | 增加有机相比例至70% |
三、操作注意事项
1. 基础维护
- 使用前需进行柱头压差检测(建议>0.5MPa)
- 长期不用时需保存在甲醇/乙腈(3:1)溶液中
2. 流动相选择
推荐使用以下流动相体系:
- 水相:0.1%三氟乙酸(适用于生物大分子)
- 有机相:乙腈/甲醇(含0.1%三氟乙酸)
- 缓冲液:磷酸盐缓冲体系(pH 7.4)
3. 梯度优化
建议采用线性梯度程序示例:
时间(min) | 有机相比例(%) |
0-10 | 20 |
10-25 | 20→80 |
25-30 | 80→20 |
4. 故障排查
- 基线漂移:检查流动相纯度及三氟乙酸浓度
- 峰形变形:排查柱温稳定性(建议25±2℃)
- 柱效下降:进行梯度冲洗(0.1% NaOH→甲醇→水)
具体操作需参考《高效液相色谱方法学指南》及Symmetry C18产品技术手册。
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